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tinychan新蟲 (初入文壇)
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[求助]
同源克隆、簡并引物、RACE 已有1人參與
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最近在做同源克隆，下載了同源基因的CDS，通過核苷酸比對設(shè)計(jì)了簡并引物，在基因組DNA上擴(kuò)增得到預(yù)期片段，測序、比對結(jié)果顯示為目的片段。 疑問一：cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，同一對引物得到片段比基因組短了100多bp,心想可能有內(nèi)含子吧，結(jié)果測序結(jié)果顯示根本就不是目的基因。這是為什么呢？ 疑問二：在基因組得到的核心片段上設(shè)計(jì)了RACE的基因特異性引物，通過RACE的兩輪PCR得到5‘-RACE產(chǎn)物測序，結(jié)果在序列上找不到我的特異性引物，序列無法與核心片段拼接，NCBI上比對發(fā)現(xiàn)這又是另外一個基因。心塞了，為什么會這樣子呢？  求大神指導(dǎo)指導(dǎo)！ |
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yingheqian
金蟲 (著名寫手)
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2樓2015-05-16 13:30:53
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