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wenwen王新蟲(chóng) (初入文壇)
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熒光定量PCR的溶解曲線是倒著的，原因可能是什么？ 已有1人參與
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做某個(gè)基因的熒光定量PCR，目的基因的溶解曲線是倒著的，內(nèi)參基因的溶解曲線是正著的。原因是什么？ H1SBRZ3{3$7WB8%VNAT}Q1P.png |
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【答案】應(yīng)助回帖
| 你這熔解曲線的條件設(shè)置有問(wèn)題。先高溫在低溫隨后緩慢升溫，在升溫的過(guò)程中測(cè)量熒光信號(hào)的變化。溶解曲線就是為了區(qū)分樣品是否有非特異性擴(kuò)增和初始模板有無(wú)被污染的情況，我們實(shí)驗(yàn)室用BIOGHC -PCR檢測(cè)了DNA,如果出現(xiàn)單一峰且峰值在Tm值位置出現(xiàn)，這就證明沒(méi)有非特異性擴(kuò)增，且初始模板沒(méi)有被污染；如果出現(xiàn)多個(gè)峰，估計(jì)是有非特異性擴(kuò)增了或者初始模板被污染了。 |
2樓2019-03-26 16:00:44
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