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zhangjie2005木蟲 (小有名氣)
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[求助]
大分子蛋白的原核表達 已有1人參與
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| 本人初涉蛋白表達領(lǐng)域，要做的蛋白分子較大，有900個氨基酸，看文獻中是先做一下蛋白可溶性分析和免疫原性分析，然后再做部分片段的原核表達。想請問一下應(yīng)該怎么做這兩種分析？用什么軟件？跪謝！ |
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 蛋白表達純化與檢測 |
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蛋白的可溶性分析通常是用SDS-PAGE來做，具體操作如下： 誘導(dǎo)表達后，12000 rpm離心1 min收獲菌體，50 mL菌液沉淀用5 mL結(jié)合緩沖液重懸，經(jīng)超聲波充分破碎后離心，沉淀重懸于1/10 體積的結(jié)合緩沖液中，分別取上清及沉淀進行電泳分析。取1.5ml誘導(dǎo)后的菌液，離心后將菌體重懸于100 ul Buffer A中，冰浴30分鐘。離心收集菌體，上清即為周質(zhì)蛋白部分，沉淀重懸于0.1mol/L Tris-HCl（PH8.0）溶液中，凍融破碎細胞，離心，上清為胞質(zhì)部分，沉淀部分為不溶性包涵體和細胞膜組分。將各組分加入SDS-PAGE樣品緩沖液，進行SDS-PAGE分析。 結(jié)合緩沖液: 0.5 mol/LNaCl，20 mmol/L Tris•Cl，2 mmol/L ZnCl2，5 mmol/L咪唑，PH7.5 Buffer A: 1mg/ml 溶菌酶、20% 蔗糖、30 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L EDTA，PH8.0. 注意大分子蛋白表達時很容易降解 免疫原性檢測可以用Western Blot來做 |
2樓2015-05-20 11:40:50
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嗯，因為我主要從事的是蛋白表達的下游實驗部分，所以對上游的分析做的比較少，我找同事問了一下，他們給我一個網(wǎng)址，你可以到上面對你的蛋白進行一下測試。祝你成功 http://mips.helmholtz-muenchen.de/proso/proso.seam |
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zhangjie20054樓2015-05-21 09:18:31
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5樓2015-05-21 20:00:17
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