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linden00

銅蟲 (初入文壇)

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[求助] 蛋白上清表達(dá)無(wú)活性，求復(fù)性方法已有2人參與

我的蛋白在上清中有大量表達(dá)，但是做EMSA檢測(cè)無(wú)活性，看文獻(xiàn)中是降低鹽酸胍濃度來(lái)復(fù)性的。有沒(méi)有人做過(guò)柱上復(fù)性的？想知道具體方法。我是應(yīng)該直接按包涵體的方法復(fù)性還是上清在鎳柱純化的同時(shí)復(fù)性呢？另外蛋白中有幾個(gè)半胱氨酸，沒(méi)有二硫鍵，是不是一定要加巰基乙醇來(lái)保護(hù)巰基？

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1樓 2015-05-26 11:01:46

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pennchem

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linden00: 金幣+10 2015-05-27 10:04:33

如果是核酸結(jié)合蛋白，有沒(méi)有考慮到buffer不適當(dāng)，并不是蛋白沒(méi)有活性？

比如加入10 mM Mg ++ , 10 uM Zn ++?

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行至水窮處，坐看云起時(shí)

5樓2015-05-26 19:28:31

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viki_MDK

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納尼，在上清中不就是可溶的么？你復(fù)性也是為了可溶呀？這不是畫蛇添足么。

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3樓2015-05-26 15:42:07

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3樓: Originally posted by viki_MDK at 2015-05-26 15:42:07
納尼，在上清中不就是可溶的么？你復(fù)性也是為了可溶呀？這不是畫蛇添足么。

但是上清無(wú)活性呀

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4樓2015-05-26 17:11:09

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5樓: Originally posted by pennchem at 2015-05-26 19:28:31
如果是核酸結(jié)合蛋白，有沒(méi)有考慮到buffer不適當(dāng)，并不是蛋白沒(méi)有活性？

比如加入10 mM Mg ++ , 10 uM Zn ++?

有按參考文獻(xiàn)加入鎂離子，不知道是不是沒(méi)有加還原劑保護(hù)巰基的原因，如果需要加還原劑一般是多大濃度

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6樓2015-05-26 19:44:04

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普通表情龍兔虎貓

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