 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2322 | 回復(fù): 30 | |||
[求助]
各位蟲友能幫忙分析下我提取的果實(shí)RNA問題可能出在哪嗎？ 已有9人參與
|
|||
|
操作步驟 1) 取 800ul 提取緩沖液加入 2ml 離心管中，預(yù)熱至 65℃ 2) 取新鮮樣品放入研缽，在液氮中迅速研磨成粉末狀。 3) 迅速將 50-100mg 粉末狀樣品轉(zhuǎn)入預(yù)熱的提取緩沖液中， 渦旋振蕩器混勻，65℃水浴 10min，每隔 2min 混勻一次。 4) 水浴結(jié)束后， 冷卻至室溫。 5) 向離心管中加入等體積氯仿/異戊醇(24:1)， 渦旋振蕩器充分混勻，冰浴10min。 6) 離心管在 4℃下 12000×g 離心 10min。 7) 取上清，轉(zhuǎn)入新的 2ml 離心管，重復(fù)操作(5)、 (6)。注：如果中間層仍有物質(zhì)，可以繼續(xù)重復(fù)步驟（ 5）和（ 6），直至中間層較干凈為止（但最多抽提 4 次，過柱時(shí)抽提 3 次，否組次數(shù)太多會(huì)降解）。 8) 取上清，轉(zhuǎn)入新的 1.5ml 離心管中， 加入 1/3 體積的 8M LiCl，混勻，加入等體積的異丙醇，混勻， 放入-20℃冰箱1小時(shí)。 9) 4℃， 12000×g 離心 15 min。棄掉上清，注意不要倒出沉淀。 10) 向 RNA 沉淀中加入 1ml 75％乙醇， 漩渦振蕩器上振蕩混勻 5s， 4oC， 7500×g離心 5min，棄上清。 11) 4oC， 7500×g 離心 1min，用槍頭小心吸棄多余液體。 提取了很多次，效果都不好！懇請(qǐng)各位幫忙分析一下！圖中間是mark，右邊是實(shí)驗(yàn)提取的RNA。是不是RNA降解的太厲害？還是DNA降解所出現(xiàn)的拖尾現(xiàn)象？ IMG_2443.JPG |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有292人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 第一次提RNA,請(qǐng)各位前輩指點(diǎn)！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 提取的RNA電泳后條帶
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助各位大神啊 關(guān)于植物果實(shí)RNA提取過程中碾碎問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求問提RNA的樣品需要加入Trizol保存嗎？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Trizol 法怎么提取高質(zhì)量RNA
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 幫忙看一下提的真菌RNA 跑的電泳 謝謝啦~~~
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 總RNA電泳圖求分析
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 請(qǐng)問在提RNA的時(shí)候，用氯仿：異戊醇=24:1，還是用氯仿？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 細(xì)胞RNA提取一直失敗 ，什么原因？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 姜的總RNA提取，電泳只有一條帶
已經(jīng)有29人回復(fù)
- Trizol提取的RNA有粘稠，跑膠有amear，怎么處理？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 請(qǐng)大家?guī)臀曳治鱿挛姨岬馁|(zhì)粒怎么這么多條帶呀?
已經(jīng)有10人回復(fù)
- RNA提取電泳效果不好
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 有關(guān)細(xì)胞總RNA提取
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 提取的RNA 濃度低還能做電泳檢測(cè)質(zhì)量嗎？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- Trizol 法 RNA提取失敗 請(qǐng)蟲友幫忙分析下 什么原因?該怎么辦吖
已經(jīng)有18人回復(fù)
- RNA電泳圖分析
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 植物RNA提取電泳圖，求解析！
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 提取RNA后，反轉(zhuǎn)錄后用β-actinpcr很多條帶
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 提取的rna濃度只有60ng/ul，影響逆轉(zhuǎn)錄嗎，請(qǐng)好心蟲友指點(diǎn)
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 植物RNA提取試劑盒
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 質(zhì)粒DNA提取成了這樣，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌?/a>
已經(jīng)有27人回復(fù)
lichj
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 305.5
- 帖子: 21
- 在線: 9.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 242416
- 注冊(cè): 2006-04-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小茶91520: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-06-17 16:36:38
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小茶91520: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-06-17 16:36:38
| 從圖上看RNA明顯降解了。不知道你的試劑是什么配方，植物中富含多酚和多糖，果實(shí)中多糖含量很高，用常用試劑通常效果不好，現(xiàn)在有很多文獻(xiàn)，里面是一些改良方法，比如加入PVP除酚類物質(zhì)，巰基乙醇防止氧化，licl是可以除多糖的，但是它在沉淀RNA的時(shí)候是選擇性沉淀分子量大的RNA，一些低分子量的可能會(huì)丟失，你如果做小RNA，或tRNA類的研究最好不用此方法，可以用終濃度10%的乙醇離心去除多糖。多查查文獻(xiàn)吧，我們提這一類的植物RNA都是自己配制的試劑，比試劑盒好一些。 |
14樓2015-06-17 15:39:15
2樓2015-06-16 20:17:46
3樓2015-06-16 21:50:04
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
- 紅花: 37
- 帖子: 1700
- 在線: 269.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 322365
- 注冊(cè): 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
4樓2015-06-16 23:34:49
781055707
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 291 (大學(xué)生)
- 金幣: 3118.2
- 散金: 46
- 紅花: 19
- 帖子: 2030
- 在線: 579.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 3046113
- 注冊(cè): 2014-03-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2015-06-17 00:08:21
6樓2015-06-17 00:38:46
7樓2015-06-17 08:45:47
8樓2015-06-17 08:47:01
9樓2015-06-17 08:47:54
10樓2015-06-17 09:14:45
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小茶91520 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +9 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +4 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 北京林業(yè)大學(xué)碩導(dǎo)招生廣告 +6 | kongweilin 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
材料學(xué)碩，求調(diào)劑
 6+5
|
糖葫蘆888ll 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +8 | 匹克i 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +4 | @taotao 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +11 | junqihahaha 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +4 | 朵朵- 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽(yáng)轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +5 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿國(guó)科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-23 | 8/400 |
|