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蛋白質(zhì)純化問題 已有3人參與
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現(xiàn)在目前遇到的問題： 1，超濾過程中蛋白質(zhì)的去除率能夠達到多少，有篇文獻上，題名“Simplified purification of equine chorionic gonadotropin (eCG) – an example of the use of magnetic microsorbents for the isolation of glycoproteins from serum”表2中，達到了98% 2.不知道這種酸性蛋白能不能用陽離子交換樹脂進行純化，可是真的有發(fā)現(xiàn)，文獻比我的蛋白等電點p低的ecg用了陽離子交換樹脂，“題名”Extraction of Equine Chorionic Gonadotrophin from Pregnant Mare Plasma by Direct Adsorption on Chromatographic Media“。 3，離子交換介質(zhì)的上樣緩沖液，假如是乙酸鈉緩沖液，那洗脫的時候能否使磷酸鹽緩沖液。 4，由于活性的測定過程比較麻煩，費錢費力，所以不能更多的嘗試方法。 |
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2樓2015-06-16 20:59:23
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3樓2015-06-16 21:29:17
冼亮淀粉酶
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4樓2015-06-16 21:53:07
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冼亮淀粉酶
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7樓2015-06-16 23:39:33
惡魔的左眼
木蟲 (正式寫手)
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8樓2015-06-18 10:33:18
calorimetry
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
bao可雅: 金幣+20 2015-07-06 09:49:36
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bao可雅: 金幣+20 2015-07-06 09:49:36
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我說一次選擇離子交換柱的一般原則。 在考慮離子交換劑（離子交換功能基團）的強弱時，如果目的蛋白質(zhì)很穩(wěn)定，應首先選用強交換介質(zhì)，強交換介質(zhì)的動力載量不會隨pH值的不同而改變，離子交換過程遵循最基本的吸附原理。所謂的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，一般可從其耐受的酸堿性、離子強度、溫度范圍這幾個角度考慮，考慮蛋白質(zhì)的穩(wěn)定的極限是防止蛋白質(zhì)變性，而不是發(fā)生蛋白質(zhì)共價修飾，甚至降解。用各種層析柱分離提純蛋白質(zhì)時，一般不是常溫，就是低溫，所以通常不必考慮溫度對于需要層析的目的蛋白質(zhì)的影響，但是蛋白質(zhì)的酸堿性和離子強度的耐受性則必須要考慮。這點是很多蛋白質(zhì)分離提純的新手所容易忽略的。 使用強離子交換介質(zhì)允許較大的吸附pH及離子交換強度選擇范圍，目的分子吸附后只需要提高緩沖的鹽濃度即可洗脫，同時可有目的分子的濃縮效應。而若離子交換介質(zhì)pH適用范圍較小，在pH小于6時，弱陽離子交換介質(zhì)失去電荷，而在pH大于9時，弱陰離子交換介質(zhì)失去電荷。所以，一般情況下，在分離等電點pH 6-9的目的蛋白質(zhì)，尤其是當目的蛋白質(zhì)分子不穩(wěn)定時，需要較溫和的色譜條件才會選用弱交換介質(zhì)。對于未知的蛋白質(zhì)進行離子交換層析柱分離提純時，也建議首先使用弱交換介質(zhì)。 樓主的蛋白質(zhì)的等電點在2.2，如果選擇陽離子交換層析，你的緩沖溶液的pH必須要低于2.2，保證你的目的蛋白質(zhì)能夠帶上正電荷，進而能夠掛在陽離子交換層析柱上。真的有沒有緩沖溶液到了這樣的pH還有緩沖容量？我是沒有聽說過，可能以后會有吧。 當然，利用陰離子交換層析柱就很方便了，只要你的緩沖溶液的pH高于于2.2，保證你的目的蛋白質(zhì)能夠帶上負電荷，進而能夠掛在陰離子交換層析柱上就行。這樣的緩沖液很容找到。 超濾一般只能夠用于去除無機和有機小分子，這些小分子至少與一般的常見蛋白質(zhì)的相對分子量相差2個數(shù)量以上，這是超濾離心管的濾膜的孔徑?jīng)Q定的，由于一個超離心管就只有一層膜一種濾過孔徑，所以凡是不能穿過的蛋白質(zhì)都留下了，所以超濾離心管根本不可能用于分離純化不同的蛋白質(zhì)！跟不要說什么分離效率了。超濾離心管是除去小分子物質(zhì)的. |
9樓2015-06-18 14:00:10
calorimetry
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10樓2015-06-18 14:05:21
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