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SDAUWY

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[求助] 分子新手，PCR產(chǎn)物回收濃度太低，請(qǐng)教各位蟲(chóng)友！已有6人參與

本人剛開(kāi)始接觸分子方面的試驗(yàn)，準(zhǔn)備做RNA干擾，目前正用帶T7的引物跑PCR，產(chǎn)物帶挺亮，然后用天根的試劑盒切膠回收的濃度太低，一般都在30ng/μl左右。我后續(xù)要用這個(gè)回收產(chǎn)物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 這個(gè)試劑盒的程序，要求模板量在1 μg，但我的回收產(chǎn)物遠(yuǎn)不夠這個(gè)量，請(qǐng)教各位蟲(chóng)友怎么提高回收產(chǎn)物的量，或者有做過(guò)這個(gè)的我想請(qǐng)教下整個(gè)過(guò)程，非常感謝！

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1樓 2015-06-17 22:30:30

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SDAUWY

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 博克儂浮碼 at 2015-06-18 10:36:19
多擴(kuò)幾管PCR，在回收過(guò)柱子的時(shí)候把離心后的液體再過(guò)一遍柱子，洗脫時(shí)也是，洗脫兩次，加的洗脫液量不要太大，我這樣做回收的時(shí)候濃度在100-300ng/ul左右

謝謝，我再試試，今天剛跑的PCR產(chǎn)物有500-600的濃度，按你的說(shuō)法做做試試看能回收到多少

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4樓2015-06-18 15:54:09

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博克儂浮碼

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SDAUWY(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:09

多擴(kuò)幾管PCR，在回收過(guò)柱子的時(shí)候把離心后的液體再過(guò)一遍柱子，洗脫時(shí)也是，洗脫兩次，加的洗脫液量不要太大，我這樣做回收的時(shí)候濃度在100-300ng/ul左右

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2樓2015-06-18 10:36:19

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doudou_32

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SDAUWY(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:17

如果你跑出來(lái)的帶是單一一條帶，可以試試PCR產(chǎn)物回收試劑盒，回收效率會(huì)高一些。

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3樓2015-06-18 11:03:24

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yangjingjing

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搖菌時(shí)間稍微增加；菌量加大回收；洗脫液少放點(diǎn)就好了

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努力打敗一切

5樓2015-06-19 10:35:02

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