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alman001銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌液PCR條帶大小總是和連接片段不一致啊！ 已有3人參與
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本人利用clontech的genome walker universal kit擴(kuò)增一個(gè)基因的5'啟動(dòng)子序列，擴(kuò)增出了800bp-3000bp大小不一的各種條帶，然后切膠回收，連接到pMD19-T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，之后挑單克隆做菌液PCR（用的是通用引物M13-F/R）。 問題來了： 我的菌液PCR分三種情況：a. 800bp的插入片段，菌液P出來還是800bp左右，這個(gè)比較正常 b.1000bp的插入片段，菌液P出來也是800bp左右，不正常 c.2000bp的插入片段，菌液P出來也是800bp左右，不正常 然后我把三種情況的菌液各挑出來3個(gè)去測序，發(fā)現(xiàn)三種情況之間測出來的結(jié)果一致性還比較高，為什么不同大小的片段P出來的條帶大小都變��？？但是測序結(jié)果卻比較相似，兩者有什么聯(lián)系嗎？？？ 大家快來幫幫我��！ |
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- 構(gòu)建載體后，菌液PCR，沒有目的條帶�。�！
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- 請教：菌液pcr帶總是很弱，為什么？
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王希望
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2樓2015-07-02 15:29:30
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有思路！ 4樓2015-07-03 09:36:50
王希望
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6樓2015-07-09 22:09:25
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