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alman001銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
菌液PCR條帶大小總是和連接片段不一致�。� 已有3人參與
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本人利用clontech的genome walker universal kit擴(kuò)增一個(gè)基因的5'啟動(dòng)子序列，擴(kuò)增出了800bp-3000bp大小不一的各種條帶，然后切膠回收，連接到pMD19-T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，之后挑單克隆做菌液PCR（用的是通用引物M13-F/R）。 問(wèn)題來(lái)了： 我的菌液PCR分三種情況：a. 800bp的插入片段，菌液P出來(lái)還是800bp左右，這個(gè)比較正常 b.1000bp的插入片段，菌液P出來(lái)也是800bp左右，不正常 c.2000bp的插入片段，菌液P出來(lái)也是800bp左右，不正常 然后我把三種情況的菌液各挑出來(lái)3個(gè)去測(cè)序，發(fā)現(xiàn)三種情況之間測(cè)出來(lái)的結(jié)果一致性還比較高，為什么不同大小的片段P出來(lái)的條帶大小都變��？？但是測(cè)序結(jié)果卻比較相似，兩者有什么聯(lián)系嗎？？？ 大家快來(lái)幫幫我�。� |
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Anna Chen
新蟲(chóng) (小有名氣)
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7樓2016-01-06 13:52:45
王希望
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2樓2015-07-02 15:29:30
那是我的-
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3樓2015-07-02 15:42:55
alman001
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有思路！ 4樓2015-07-03 09:36:50
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