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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于轉錄組測序建庫的問題
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ocean_chris新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關于轉錄組測序建庫的問題 已有2人參與
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最近在了解一些高通量測序相關的知識，對建庫方面有些不了解，所以想請了解的大神幫忙解答一下。不勝感激！ 1. 轉錄組測序在建庫時有一步是RNA片段反轉錄合成cDNA第一鏈，然后再合成第二鏈cDNA，之后加測序接頭，最后PCR擴增建庫。這里為什么要合成第二鏈后才加接頭？為什么不直接在第一鏈加接頭就直接PCR擴增？這樣在PCR擴增的時候不也一樣合成了第二鏈了嗎？ 2. 還有一種連特異性建庫的時候，是在第二條鏈合成的時候用U代替T，然后雙鏈加接頭，之后降解掉含U的第二條鏈，最后也要PCR富集建庫，這里不明白的是降解掉第二條鏈了之后又PCR的話，不久又有第二條鏈合成了嗎？ 還請大家?guī)兔獯鹨幌聗謝謝~ |
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 高通量測序 |
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2樓2015-07-07 23:34:51
great07225388
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