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尋香海棠新蟲 (初入文壇)
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PCR就是不出目的條帶！�。�！ 已有1人參與
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我想做基因敲除，準(zhǔn)備敲除的下游臂擴(kuò)出來沒有問題。 但是上游臂就是擴(kuò)不出來。梯度PCR和降落PCR都試了，還是不行。引物設(shè)計(jì)的是60度的退火溫度，軟件是Omiga2.0. 引物也重新設(shè)計(jì)過了，向上增加了100bp左右，還是沒有條帶 用的菌株不是植物乳桿菌標(biāo)準(zhǔn)株，參考是WCFS1 諸位幫我分析一下！ |
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這個(gè)問題，我遇到過，我選擇的第一個(gè)方案往往是設(shè)計(jì)溫度梯度進(jìn)行擴(kuò)增，48-68度均試過，大部分能出來。但是還是有頑強(qiáng)的，如果結(jié)合引物的目的基因位置，自身不是很好和引物結(jié)合，判斷結(jié)合好壞有G值決定的，不能偏低。會(huì)導(dǎo)致沒有擴(kuò)增條帶，我們往往就是往外或者往里，從新設(shè)計(jì)引物。往往能批出條帶。多設(shè)幾個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)的引物，不差錢。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-09-26 00:28:43
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