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尋香海棠新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR就是不出目的條帶。。。 已有1人參與
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我想做基因敲除,準(zhǔn)備敲除的下游臂擴(kuò)出來沒有問題。 但是上游臂就是擴(kuò)不出來。梯度PCR和降落PCR都試了,還是不行。引物設(shè)計(jì)的是60度的退火溫度,軟件是Omiga2.0. 引物也重新設(shè)計(jì)過了,向上增加了100bp左右,還是沒有條帶 用的菌株不是植物乳桿菌標(biāo)準(zhǔn)株,參考是WCFS1 諸位幫我分析一下! |

新蟲 (初入文壇)

銀蟲 (小有名氣)

木蟲 (著名寫手)
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這個(gè)問題,我遇到過,我選擇的第一個(gè)方案往往是設(shè)計(jì)溫度梯度進(jìn)行擴(kuò)增,48-68度均試過,大部分能出來。但是還是有頑強(qiáng)的,如果結(jié)合引物的目的基因位置,自身不是很好和引物結(jié)合,判斷結(jié)合好壞有G值決定的,不能偏低。會(huì)導(dǎo)致沒有擴(kuò)增條帶,我們往往就是往外或者往里,從新設(shè)計(jì)引物。往往能批出條帶。多設(shè)幾個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)的引物,不差錢。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

銀蟲 (小有名氣)

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