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夏木魯魯

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1樓 2016-01-13 19:36:26

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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-01-13 22:51:07

I think you should use a positive control, such as amplification of housekeeping gene (Actin, etc.), which really does much help for troubleshooting.

Therefore, you should amplify a housekeeping gene using your DNA samples tomorrow.

贊一下(5人)

5樓2016-01-13 20:02:14

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夏木魯魯

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除了58c退火以外。56 59 60 都做了。效果差不多。
體系模板2ul 3ul 4ul 5ul 都做了。結果沒有什么變化

3樓2016-01-13 19:45:34

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chiemo

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你怎么判定是引物二聚體的？是否因為合成的引物不純？可以試試touchdown PCR，我之前跑出來有雜帶，touchdown后就只有目標序列了

6樓2016-01-14 10:48:41

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模版降解、引物不對，有可能的

7樓2016-01-14 13:25:34

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匿名

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8樓2016-01-14 13:35:14

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用actin檢測模板，看模板是不是有問題。如果沒有問題就降低模板的量，1-2ul，56度在試試。如果還是不行就是引物的問題

科研是條不歸路！

10樓2016-01-14 14:41:36

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 夏木魯魯 at 2016-01-13 19:42:41
因為傳圖好像有限制。大家將就看(⊙o⊙)。
反應條件。預變性94c。  5min
                  變性94c。  30s
                  退火58c    30s
                  延伸72c    45s
共40個循環(huán) ...

一般不是做30個循環(huán)么？？？

努力翻身

11樓2016-01-14 14:52:09

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因為傳圖好像有限制。大家將就看(⊙o⊙)。
反應條件。預變性94c。  5min
                  變性94c。  30s
                  退火58c    30s
                  延伸72c    45s
共40個循環(huán)
                  最后延伸72c 10min

2樓2016-01-13 19:42:41

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沒有條帶的話就降溫，試試56，55，54，53，52

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4樓2016-01-13 19:51:12

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可以設置陽性對照，適當降低退火溫度，檢查模板