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夏木魯魯

新蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] PCR的結(jié)果只有引物二聚體出來(lái)，目的片段沒(méi)有。換過(guò)很多條件。求大神指導(dǎo) 已有9人參與

做的是金銀花ITS2序列
體系總25ul
mix 12.5ul
引物1 1ul
引物2 1ul
雙蒸水 7.5ul
模板 3ul

下面是兩個(gè)引物的條帶。不過(guò)可能圖倒了

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夏木魯魯

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1樓 2016-01-13 19:36:26

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Ciruela

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【答案】應(yīng)助回帖

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模版降解、引物不對(duì)，有可能的

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7樓2016-01-14 13:25:34

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夏木魯魯

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因?yàn)閭鲌D好像有限制。大家將就看(⊙o⊙)。
反應(yīng)條件。預(yù)變性94c。  5min
                  變性94c。  30s
                  退火58c    30s
                  延伸72c    45s
共40個(gè)循環(huán)
                  最后延伸72c 10min

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2樓2016-01-13 19:42:41

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除了58c退火以外。56 59 60 都做了。效果差不多。
體系模板2ul 3ul 4ul 5ul 都做了。結(jié)果沒(méi)有什么變化

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3樓2016-01-13 19:45:34

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金木研么么噠

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

沒(méi)有條帶的話就降溫，試試56，55，54，53，52

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4樓2016-01-13 19:51:12

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普通表情龍兔虎貓

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