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Zwy520533新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
酶切后沒(méi)有目的帶 已有1人參與
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cd40-t18用BamH1和Bsa1大酶切后，跑膠完全沒(méi)有目的帶，為什么？只有載體片段，沒(méi)有目的基因片斷？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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Zwy520533
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是這樣的，我用連接了T18載體的目的基因，做轉(zhuǎn)化，測(cè)序正確。然后提的質(zhì)粒，然后進(jìn)行酶切，先用BamH1再用bsa1，跑膠之后膠回收，做了4次，要么只有目的帶，要么只有載體帶，要么都有，但是目的帶很淺，根本回收不回來(lái)，到底什么原因，酶切體系錯(cuò)了還是說(shuō)酶切量不夠，都解釋不通呢 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2016-03-06 21:33:40
jackyoung
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切下來(lái)應(yīng)該多大？如果片段大小小于載體很多，而小片段整體量不夠會(huì)造成無(wú)法檢測(cè)。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2016-03-06 09:10:18
Zwy520533
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3樓2016-03-06 09:12:37
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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額，都是問(wèn)號(hào)，到底是什么條帶都沒(méi)有，還是只有載體條帶呢？首先，你這是挑的克隆子在做驗(yàn)證么，沒(méi)有目的片段不就是陰性克隆么，重新挑取轉(zhuǎn)化子驗(yàn)證。其次，可以結(jié)合pcr的方法來(lái)輔助酶切結(jié)果，如果是質(zhì)粒濃度低導(dǎo)致檢測(cè)不到，則pcr相對(duì)更靈敏些，如果pcr驗(yàn)證正確，那基本就是你質(zhì)粒抽提的問(wèn)題了，祝好！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2016-03-06 09:19:54
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