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wy604987664新蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙酶切連接不成功 已有3人參與
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用賽默飛快切酶Nde1和Sma1雙酶切，Nde1和Bamh1雙酶切，37℃酶切2小時(shí)，連接始終不成功，測序不是沒信號(hào)就是載體自連。載體確定沒問題，酶也沒問題。做了3次了，什么問題呢？就差這兩個(gè)載體實(shí)驗(yàn)就做完了，求幫助��！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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原來，是這樣
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-22 20:08:19
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-22 20:08:19
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個(gè)人建議做TA克隆，然后再酶切目的基因。我試過NdeI 這個(gè)內(nèi)切酶，不是一般的難，7個(gè)保護(hù)堿基切20小時(shí)效率才75%左右。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2017-05-19 10:19:35
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8樓2017-05-19 16:29:07
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11樓2017-05-21 11:44:54
wy604987664
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我好暴躁啊
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層主，我現(xiàn)在也在做這個(gè)雙酶切，有木有好辦法確定雙切成功，我現(xiàn)在是載體兩個(gè)酶分開切，而且都是同時(shí)用兩個(gè)酶單酶切，結(jié)果是，這倆酶都好使，但是目的基因就沒法看是不是酶切成功了，轉(zhuǎn)化后菌長了特別多。怎么改進(jìn)一下 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2017-05-21 10:21:34
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