 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3436 | 回復(fù): 8 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
zhiqiang5070木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
膠回收產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化后菌液PCR電泳條帶出現(xiàn)問題
|
|||
|
我的cDNA膠回收后條帶約1000kb強，之后連接到T載體上（將回收產(chǎn)物與pMD18-T載體16℃連接過夜，膠回收DNA4.5微，T載體 0.5微，SolutionI 5微升），之后轉(zhuǎn)化到天根公司Ｅ.ｃｏｌｉ感受態(tài)細胞中，接菌，挑菌后搖菌。之后菌液ＰＣＲ（自己的引物和Ｍ１３引物分別跑了都差不多），可是電泳條帶發(fā)生改變，出現(xiàn)了２０００多ｋｂ的條帶。 各位學(xué)長學(xué)姐，請問這是怎么回事？好像出現(xiàn)了ｃＤＮＡ自己連接起來的現(xiàn)象。還有如何解決？本人小蟲，沒啥金幣，還望見諒。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 核酸生物學(xué)實驗經(jīng)驗 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有168人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于PCR產(chǎn)物膠回收連T載的問題～
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)問題了
已經(jīng)有23人回復(fù)
- PCR后電泳問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR條帶很淡不好膠回收怎么辦
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 用膠回收產(chǎn)物PCR的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物及PCR膠回收產(chǎn)物的存放問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后細菌提質(zhì)粒，PCR條帶很詭異
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 菌液PCR產(chǎn)物電泳圖，怎么解釋？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后菌液PCR鑒定，沒有目的條帶
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)雜帶是什么原因？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 電泳條帶很淡，能用于割膠回收嗎
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 菌液PCR沒東西，但是提完質(zhì)粒能跑出來條帶，為什么�。�
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 膠回收后再次pcr無目的條帶，急，望神人指點。。。
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物的電泳條帶出問題了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一樣！！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 連接與轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 膠回收后電泳檢測，條帶向相反方向跑是怎么回事？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物回收之后跑膠濃度過低
已經(jīng)有17人回復(fù)
- PCR和回收條帶的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于切膠回收后有質(zhì)粒污染和拼接PCR涂抹裝條帶的問題，有點長，呵呵
已經(jīng)有13人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物電泳時，為什么有的條帶不亮，有的特別亮呀？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- PCR后電泳條帶異常
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】pcr條帶問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR電泳結(jié)果疑問
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物電泳問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)菌液PCR的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
8樓2012-05-10 18:56:22
zhiqiang5070
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 2711.4
- 散金: 66
- 紅花: 1
- 帖子: 459
- 在線: 117小時
- 蟲號: 743352
- 注冊: 2009-04-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
上面寫錯了，我的cDNA為1kb多點，不是1000kb，后面2kb多點，嘿嘿。
2樓2011-06-10 14:52:13
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2011-06-10 14:56:16
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專家經(jīng)驗: +57 - MolEPI: 106
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16332.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時
- 蟲號: 441757
- 注冊: 2007-10-27
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-10 15:14:34
zhiqiang5070(金幣+3): 你很厲害啊，可能是沒連上，剩余的帶應(yīng)該是空載體和非特異性產(chǎn)物 2011-06-13 08:38:28
zhiqiang5070(金幣+3): 你很厲害啊，可能是沒連上，剩余的帶應(yīng)該是空載體和非特異性產(chǎn)物 2011-06-13 08:38:28
|
著實感覺很奇怪，應(yīng)該是一條1KB的條帶。。。 考慮沒有連接上的情況，2kb很有可能是非特異性條帶； 建議： 1:重新進行連接，我看你的連接體系中DNA有點太多了，可以是載體的2-3倍（濃度，這個需要你跑膠定量的）； 2：將你現(xiàn)在疑似含有重組載體的菌劃至平板上，提取質(zhì)粒，先看看能不能提取出來，能的話再做一個酶切看看。。。 |
4樓2011-06-10 15:07:59
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +4 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +4 | 申子申申 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑 +6 | 吃吃吃才有意義 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑 +3 | 葵梓衛(wèi)隊 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +7 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +3 | ydfyh 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科鄭州大學(xué)物理學(xué)院，一志愿華科070200學(xué)碩，346求調(diào)劑 +4 | 我不是一根蔥 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +4 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +5 | 煙火先于春 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | 劉夢微 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|