 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3482 | 回復(fù): 8 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||||
zhiqiang5070木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
膠回收產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化后菌液PCR電泳條帶出現(xiàn)問(wèn)題
|
||||
|
我的cDNA膠回收后條帶約1000kb強(qiáng)，之后連接到T載體上（將回收產(chǎn)物與pMD18-T載體16℃連接過(guò)夜，膠回收DNA4.5微，T載體 0.5微，SolutionI 5微升），之后轉(zhuǎn)化到天根公司Ｅ.ｃｏｌｉ感受態(tài)細(xì)胞中，接菌，挑菌后搖菌。之后菌液ＰＣＲ（自己的引物和Ｍ１３引物分別跑了都差不多），可是電泳條帶發(fā)生改變，出現(xiàn)了２０００多ｋｂ的條帶。 各位學(xué)長(zhǎng)學(xué)姐，請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事？好像出現(xiàn)了ｃＤＮＡ自己連接起來(lái)的現(xiàn)象。還有如何解決？本人小蟲(chóng)，沒(méi)啥金幣，還望見(jiàn)諒。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有206人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有1人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于PCR產(chǎn)物膠回收連T載的問(wèn)題～
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)問(wèn)題了
已經(jīng)有23人回復(fù)
- PCR后電泳問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR條帶很淡不好膠回收怎么辦
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 用膠回收產(chǎn)物PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物及PCR膠回收產(chǎn)物的存放問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后細(xì)菌提質(zhì)粒，PCR條帶很詭異
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 菌液PCR產(chǎn)物電泳圖，怎么解釋?zhuān)?/a>
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后菌液PCR鑒定，沒(méi)有目的條帶
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 菌液PCR出現(xiàn)雜帶是什么原因？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 電泳條帶很淡，能用于割膠回收嗎
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 菌液PCR沒(méi)東西，但是提完質(zhì)粒能跑出來(lái)?xiàng)l帶，為什么�。�
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 膠回收后再次pcr無(wú)目的條帶，急，望神人指點(diǎn)。。。
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物的電泳條帶出問(wèn)題了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一樣�。�
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 連接與轉(zhuǎn)化問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 膠回收后電泳檢測(cè)，條帶向相反方向跑是怎么回事？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物回收之后跑膠濃度過(guò)低
已經(jīng)有17人回復(fù)
- PCR和回收條帶的問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于切膠回收后有質(zhì)粒污染和拼接PCR涂抹裝條帶的問(wèn)題，有點(diǎn)長(zhǎng)，呵呵
已經(jīng)有13人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物電泳時(shí)，為什么有的條帶不亮，有的特別亮呀？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- PCR后電泳條帶異常
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】pcr條帶問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR電泳結(jié)果疑問(wèn)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物電泳問(wèn)題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)菌液PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
zhiqiang5070
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 2711.4
- 散金: 66
- 紅花: 1
- 帖子: 459
- 在線: 117小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 743352
- 注冊(cè): 2009-04-08
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
上面寫(xiě)錯(cuò)了，我的cDNA為1kb多點(diǎn)，不是1000kb，后面2kb多點(diǎn)，嘿嘿。
2樓2011-06-10 14:52:13
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2011-06-10 14:56:16
天使托
專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +57 - MolEPI: 106
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16348.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 441757
- 注冊(cè): 2007-10-27
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-10 15:14:34
zhiqiang5070(金幣+3): 你很厲害啊，可能是沒(méi)連上，剩余的帶應(yīng)該是空載體和非特異性產(chǎn)物 2011-06-13 08:38:28
zhiqiang5070(金幣+3): 你很厲害啊，可能是沒(méi)連上，剩余的帶應(yīng)該是空載體和非特異性產(chǎn)物 2011-06-13 08:38:28
|
著實(shí)感覺(jué)很奇怪，應(yīng)該是一條1KB的條帶。。。 考慮沒(méi)有連接上的情況，2kb很有可能是非特異性條帶； 建議： 1:重新進(jìn)行連接，我看你的連接體系中DNA有點(diǎn)太多了，可以是載體的2-3倍（濃度，這個(gè)需要你跑膠定量的）； 2：將你現(xiàn)在疑似含有重組載體的菌劃至平板上，提取質(zhì)粒，先看看能不能提取出來(lái)，能的話再做一個(gè)酶切看看。。。 |
4樓2011-06-10 15:07:59
Arrennew
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
- 金幣: 7777.5
- 紅花: 2
- 帖子: 301
- 在線: 122.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 322853
- 注冊(cè): 2007-03-12
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 林木遺傳育種學(xué)
5樓2011-06-10 20:56:37
hellolin
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 11 (小學(xué)生)
- 金幣: 1304.2
- 散金: 116
- 帖子: 186
- 在線: 77.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1399917
- 注冊(cè): 2011-09-13
- 專(zhuān)業(yè): 昆蟲(chóng)學(xué)
6樓2011-10-28 17:30:23
dnaxxx
至尊木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 金幣: 11074.2
- 帖子: 278
- 在線: 351.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 254121
- 注冊(cè): 2006-05-27
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 病毒、病毒感染與宿主免疫
7樓2011-12-13 07:59:21
8樓2012-05-10 18:56:22
liuyancheng
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 52
- 帖子: 32
- 在線: 10.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2764227
- 注冊(cè): 2013-10-30
- 專(zhuān)業(yè): 獸醫(yī)傳染病學(xué)
9樓2014-08-13 17:52:24
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zhiqiang5070 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +9 | 是妍子也是研子 2026-03-30 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 070300化學(xué)354求調(diào)劑 +7 | 101次希望 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +11 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求化學(xué)調(diào)劑 +11 | wulanna 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +4 | 亞克西good 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +11 | 北道巷 2026-03-24 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +4 | akie... 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +6 | HanBeiNingZC 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動(dòng)力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個(gè)好覺(jué)_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料考研求調(diào)劑 +3 | Dendel 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調(diào)劑 +4 | gdlf9999 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +4 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|