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hqc87鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
RT-PCR actin內(nèi)參問(wèn)題
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| 做了兩次逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA后以actin做內(nèi)參，8個(gè)樣品actin表達(dá)量竟然不一樣�。。�？？?jī)纱危ㄒ淮斡?00ngRNA，一次用2ug）都是同一個(gè)模式，電泳條帶強(qiáng)的樣品仍舊強(qiáng)，弱的仍舊弱，而且，我在合成cDNA前 用DNase處理RNA后特意跑了下膠，檢測(cè)RNA完整性，8個(gè)樣品RNA質(zhì)量都沒問(wèn)題，但是合成cDNA后，擴(kuò)actin怎么強(qiáng)度不一樣呢，而且兩次重復(fù)模式一樣，不應(yīng)該啊，困惑啊，求解�。� |
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kgz163
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2樓2011-08-19 11:44:49
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你是反轉(zhuǎn)和表達(dá)在一管完成么 有可能你反轉(zhuǎn)錄不徹底 獲得的cDNA量就不一樣 當(dāng)然actin也確實(shí)不是很穩(wěn)定的內(nèi)標(biāo)基因在某些植物中 你可以查查別人的文章 有很多關(guān)于內(nèi)標(biāo)基因篩選的文章 |
3樓2011-08-19 12:47:08
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