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[求助] 關(guān)于連接轉(zhuǎn)化載體和片段的問題

關(guān)于連接轉(zhuǎn)化載體和片段的問題：做了一段時(shí)間的連接轉(zhuǎn)化，一直有個(gè)問題困擾著我，就是在連接轉(zhuǎn)化的時(shí)候看了很多的資料都說載體和片段的比例在1：3比較合適，我就想問，載體的濃度是說在質(zhì)粒酶切之后膠回收的濃度的還是酶切之前的原始質(zhì)粒濃度。

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1樓 2012-06-27 09:55:55

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陳朵朵

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

是指的回收之后的濃度，載體與片段濃度之比在1：3-1：10都行，影響不太大。

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2樓2012-06-27 10:10:10

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-27 13:41:50

這個(gè)比例指的是你的目的片段（待連接到載體上的片段）與載體的濃度，或者說可以是分子數(shù)的比值。樓上說的范圍都可以，1：3-1：10，視情況而定。

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3樓2012-06-27 10:20:18

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3樓: Originally posted by 太極拳 at 2012-06-27 10:20:18
這個(gè)比例指的是你的目的片段（待連接到載體上的片段）與載體的濃度，或者說可以是分子數(shù)的比值。樓上說的范圍都可以，1：3-1：10，視情況而定。

那請(qǐng)問載體大概在7000bp的，片段大概在2000bp做10ul的體系，比例還怎么加啊，是按照1：3計(jì)算加么，我用那個(gè)微量分光光度計(jì)測(cè)定的載體濃度大概在15ng/ul，片段的濃度大概在60左右，請(qǐng)幫我詳細(xì)計(jì)算一下，謝謝

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4樓2012-06-28 01:13:50

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 陳朵朵 at 2012-06-27 10:10:10
是指的回收之后的濃度，載體與片段濃度之比在1：3-1：10都行，影響不太大。

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5樓2012-06-28 01:14:02

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

5樓: Originally posted by a13515517892 at 2012-06-28 01:14:02
那請(qǐng)問載體大概在7000bp的，片段大概在2000bp做10ul的體系，比例還怎么加啊，是按照1：3計(jì)算加么，我用那個(gè)微量分光光度計(jì)測(cè)定的載體濃度大概在15ng/ul，片段的濃度大概在60左右，請(qǐng)幫我詳細(xì)計(jì)算一下，謝謝...

1:3是摩爾比，根據(jù)DNA的質(zhì)量與摩爾換算公式(xxx ug*10e6)/(660pg*bp數(shù)）=xxx pmol 所以計(jì)算后 DNA與載體的摩爾濃度比為1：1.14。所以10ul 體系你可以DNA片段加 6ul，載體2ul 或者1ul ， T4連接酶 1ul， buffer 1ul ， ddH2O補(bǔ)齊10ul 。或者按照說明書上不加T4連接酶直接加 Solution 。如有錯(cuò)誤歡迎糾正~~

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6樓2012-06-28 11:13:02

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這個(gè)比例只是一個(gè)參考。不用嚴(yán)格按著這個(gè)比例執(zhí)行。根據(jù)載體和片段濃度自行調(diào)整。不用太嚴(yán)格的

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7樓2012-06-28 11:17:26

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