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桃之夭夭pFly新蟲 (初入文壇)
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[求助]
實時熒光定量 相同基因不同處理條件下的相對定量
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第一次接觸，自己也看了很多資料，依然有點糊涂，希望各位能人予以指點啊~在此先謝過了！ 目的：看一個基因在脅迫條件下表達(dá)量的變化。 實驗樣本：一株植物脅迫0,1,2,3,4,5,6h后取材 已選定目的基因和內(nèi)參基因，Tm值和產(chǎn)物長度類似 疑問：1、在確定目的基因和內(nèi)參基因擴增效率是否一致時，每個時期的樣本均需要做，還是只選擇一個時期的做就可以？ 2、在設(shè)置稀釋梯度時，同一梯度的樣本副本，是采用同一時期不同花朵所提RNA，還是同一花朵所提RNA的分裝？ 3、擴增效率是不是來篩選最佳的反應(yīng)條件的，只要是篩選到合適的，正式試驗的時候就不需要稀釋成各個梯度來做，直接以各個處理時期的樣本來擴增內(nèi)參、目的基因就可以了~？ 謝謝~ |
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