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[求助]
反轉(zhuǎn)錄后用cDNA做模板擴不出目的基因怎么辦???
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各位大俠急急求助啊! 最近小女子做分子實驗頗為不順!擴出來一個1800多的CDS全長,之后提RNA反轉(zhuǎn)錄后用CDNA當模板擴增,咋擴都得不到目的片段,程序和之前擴基因組的是一樣的,但是之前一直是好好的很漂亮的帶,只是LATaq酶擴的時候會出現(xiàn)一條弱的500bp左右片段,現(xiàn)在反轉(zhuǎn)錄后可以得到這個非特異的500bp片段,就是沒有1800多的,提高退火溫度也不行,提高1度后就什么帶都沒了!折磨死我了! 求神人幫助!萬分感謝! |


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