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cuicchao金蟲 (正式寫手)
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[求助]
畢赤酵母用于電轉(zhuǎn)化制備感受態(tài)細(xì)胞步驟
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畢赤酵母電轉(zhuǎn)化： 介紹：該方法無需產(chǎn)生去壁細(xì)胞，是產(chǎn)生畢赤酵母重組子的簡便方法。與去壁細(xì)胞效率 相似。 細(xì)胞準(zhǔn)備： 1 在含5mlYPD 的50ml 離心管中，培養(yǎng)畢赤酵母，30 度過夜 2 取0.1-0.5ml 過夜培養(yǎng)物，接種含500ml 新鮮培養(yǎng)基的2L 搖瓶，過夜生長至OD600 ＝1.3-1.5 3 在4 度，1500g離心5min收集細(xì)胞,用500ml預(yù)冷的滅菌水懸浮細(xì)胞 4 如上離心，用250 ml預(yù)冷的滅菌水懸浮細(xì)胞 5 如上離心，用20ml預(yù)冷的1M山梨醇懸浮細(xì)胞 6 如上離心，用1 ml 預(yù)冷的1M山梨醇懸浮細(xì)胞，至終體積約1.5ml 注意：可凍存80ul 等量的電感受態(tài)細(xì)胞，但轉(zhuǎn)化效率會降低很多 有誰能告訴我這步驟里面滅菌水，山梨醇處理細(xì)胞畢赤酵母細(xì)胞的原理是什么啊？ |
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cuicchao
金蟲 (正式寫手)
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低滲透是使細(xì)胞更脆吧，容易電擊穿? 
9樓2013-04-15 22:46:47
3樓2013-04-15 10:28:25
愛上文慧
銀蟲 (小有名氣)
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4樓2013-04-15 11:27:53
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5樓2013-04-15 11:30:10
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