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corner_g新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助--雙酶切連接構(gòu)質(zhì)粒
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各位大蝦，SOS ::>_<:: 要構(gòu)建一個(gè)質(zhì)粒，大片段3200，小片段800。大片段是從4300的質(zhì)粒上用SpeI和BglII雙酶切切下來的，電泳檢測片段大小沒有問題，膠回收。小片段是從另一個(gè)質(zhì)粒上PCR擴(kuò)出來的，引物導(dǎo)入的酶切位點(diǎn)，一邊一個(gè)，分別是SpeI和BglII，方向不會錯(cuò)，將PCR產(chǎn)物雙酶切回收。然后連接，用的T4，連不上。后來將小片段先連到T載上，然后雙酶切，電泳檢測，切下來了，膠回收后用T4連接，還是連不上，然后放棄T4用T載試劑盒的solutionI連接，還是連不上。。。。。。感受態(tài)沒問題。操作也沒問題。做了有一個(gè)月了。。大家有沒有碰到類似的情況呀？給點(diǎn)主意吧。。謝謝啦~新人木有錢- - [ Last edited by 1949stone on 2013-6-9 at 14:20 ] |
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