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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 求助--雙酶切連接構質粒
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corner_g新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助--雙酶切連接構質粒
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各位大蝦，SOS ::>_<:: 要構建一個質粒，大片段3200，小片段800。大片段是從4300的質粒上用SpeI和BglII雙酶切切下來的，電泳檢測片段大小沒有問題，膠回收。小片段是從另一個質粒上PCR擴出來的，引物導入的酶切位點，一邊一個，分別是SpeI和BglII，方向不會錯，將PCR產物雙酶切回收。然后連接，用的T4，連不上。后來將小片段先連到T載上，然后雙酶切，電泳檢測，切下來了，膠回收后用T4連接，還是連不上，然后放棄T4用T載試劑盒的solutionI連接，還是連不上。。。。。。感受態(tài)沒問題。操作也沒問題。做了有一個月了。。大家有沒有碰到類似的情況呀？給點主意吧。。謝謝啦~新人木有錢- - [ Last edited by 1949stone on 2013-6-9 at 14:20 ] |
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desheng101
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3樓2013-05-13 19:11:58
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4樓2013-05-14 08:31:07
5樓2013-05-14 16:37:01
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