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corner_g新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助--雙酶切連接構(gòu)質(zhì)粒
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各位大蝦,SOS ::>_<:: 要構(gòu)建一個(gè)質(zhì)粒,大片段3200,小片段800。大片段是從4300的質(zhì)粒上用SpeI和BglII雙酶切切下來(lái)的,電泳檢測(cè)片段大小沒(méi)有問(wèn)題,膠回收。小片段是從另一個(gè)質(zhì)粒上PCR擴(kuò)出來(lái)的,引物導(dǎo)入的酶切位點(diǎn),一邊一個(gè),分別是SpeI和BglII,方向不會(huì)錯(cuò),將PCR產(chǎn)物雙酶切回收。然后連接,用的T4,連不上。后來(lái)將小片段先連到T載上,然后雙酶切,電泳檢測(cè),切下來(lái)了,膠回收后用T4連接,還是連不上,然后放棄T4用T載試劑盒的solutionI連接,還是連不上。。。。。。感受態(tài)沒(méi)問(wèn)題。操作也沒(méi)問(wèn)題。做了有一個(gè)月了。。大家有沒(méi)有碰到類似的情況呀?給點(diǎn)主意吧。。謝謝啦~新人木有錢(qián)- - [ Last edited by 1949stone on 2013-6-9 at 14:20 ] |
金蟲(chóng) (小有名氣)

銀蟲(chóng) (小有名氣)
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鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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