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s24512453新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助菌落PCR的5個(gè)問題
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1.菌落pcr用不用熱解，簡單的沸水�。� 2.將擴(kuò)增的目的片段與T載體鏈接，轉(zhuǎn)化用的感受態(tài)細(xì)胞是大腸DH5α，最后平板上能長出多大比率的正確菌落呢？ 3.菌落pcr所用的引物是采用針對(duì)擴(kuò)增片段的引物為好還是采用載體上的通用引物比較好呢？ 4.菌落pcr對(duì)酶有沒有要求?用普通的Taq即可，還是用高保真？或者其他的什么酶？pcr體系和之前擴(kuò)增目的片段的體系相同？（擴(kuò)增時(shí)用高保真，菌落pcr用的話有點(diǎn)浪費(fèi)） 5目的片段是從乳酸菌里擴(kuò)增出來的，大腸感受態(tài)細(xì)胞也正好有我的目的片段，沒有對(duì)比這兩個(gè)序列一不一樣，但是名稱一樣，菌落pcr還可行嗎？ |
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yang0071
木蟲 (職業(yè)作家)
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2樓2013-10-12 15:25:39
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