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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 求助菌落PCR的5個問題
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求助菌落PCR的5個問題
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1.菌落pcr用不用熱解，簡單的沸水�。� 2.將擴增的目的片段與T載體鏈接，轉(zhuǎn)化用的感受態(tài)細胞是大腸DH5α，最后平板上能長出多大比率的正確菌落呢？ 3.菌落pcr所用的引物是采用針對擴增片段的引物為好還是采用載體上的通用引物比較好呢？ 4.菌落pcr對酶有沒有要求?用普通的Taq即可，還是用高保真？或者其他的什么酶？pcr體系和之前擴增目的片段的體系相同？（擴增時用高保真，菌落pcr用的話有點浪費） 5目的片段是從乳酸菌里擴增出來的，大腸感受態(tài)細胞也正好有我的目的片段，沒有對比這兩個序列一不一樣，但是名稱一樣，菌落pcr還可行嗎？ |
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yang0071
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2樓2013-10-12 15:25:39
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