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serhhrr

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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專(zhuān)業(yè): 微生物資源與分類(lèi)學(xué)

[求助] 大片段PCR擴(kuò)增求助已有4人參與

我需要做一個(gè)RTPCR,擴(kuò)增未知目的條帶，大小約為3000bp，循環(huán)體系如下：94℃ 30s，54-60℃ 30s ， 72℃ 3-4min。酶的話用過(guò)LA Taq，Taq酶都用過(guò)，也換人操作過(guò)，可一直P(pán)不出來(lái)，求助各位高手��！

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1樓 2013-10-23 15:50:04

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taccycle

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩。 2013-10-23 17:33:37

首先啊這個(gè)模板質(zhì)量會(huì)嚴(yán)重影響你的實(shí)驗(yàn)，做這種實(shí)驗(yàn)請(qǐng)確保你有高質(zhì)量的模板！�。。∑浯文憧梢园裀CR體系放大，把模板量加大，把延伸時(shí)間放長(zhǎng)，比如放到6min沒(méi)有問(wèn)題的

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用心

4樓2013-10-23 17:17:02

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David勇

木蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+2, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩。 2013-10-23 17:33:27

你是不是在做RACE？我也在做這個(gè)覺(jué)得挺難的。不過(guò)看資料好像混用一種高效的酶和保真的酶會(huì)比較有效。不過(guò)LA taq很多人都選這個(gè)做也能做出來(lái)。有人建議減少變性時(shí)間會(huì)有效。

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2樓2013-10-23 16:04:49

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serhhrr

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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引用回帖:

2樓: Originally posted by David勇 at 2013-10-23 16:04:49
你是不是在做RACE？我也在做這個(gè)覺(jué)得挺難的。不過(guò)看資料好像混用一種高效的酶和保真的酶會(huì)比較有效。不過(guò)LA taq很多人都選這個(gè)做也能做出來(lái)。有人建議減少變性時(shí)間會(huì)有效。

嗯，變性時(shí)間？這個(gè)我沒(méi)試過(guò)，別的都改變過(guò)來(lái)，模板也換過(guò)幾次都沒(méi)用呢

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3樓2013-10-23 16:52:20

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一葦杭之xmc

銀蟲(chóng) (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩。 2013-10-23 17:33:46

我之前做過(guò)2000bp的，一開(kāi)始用了takara的普通rTaq酶，后來(lái)聽(tīng)實(shí)驗(yàn)室老師的建議換了高保真酶，感覺(jué)效果不錯(cuò)，非特異性擴(kuò)展明顯減少了~而且擴(kuò)增的概率也大了。

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欲速則不達(dá)

5樓2013-10-23 17:27:47

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普通表情龍兔虎貓

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