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smd1168畢赤酵母轉(zhuǎn)化問題
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劃板挑單克隆菌落表面光滑，之前轉(zhuǎn)化未線性化的pPIC3.5k后長出來的單克隆也是表面光滑的，后來發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒要線性化，結(jié)果轉(zhuǎn)入線性化質(zhì)粒后菌落菌落形態(tài)就變了，表面有菌絲狀東西，有點(diǎn)像霉菌，但是是有酒香味的，難道轉(zhuǎn)化進(jìn)質(zhì)粒后酵母形態(tài)發(fā)生變化了么？大家有沒遇到過，重復(fù)2次都這個(gè)結(jié)果，萬分焦急�。�！ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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luwei13566
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1.我轉(zhuǎn)化出來的酵母和你的原菌的形態(tài)一致，你轉(zhuǎn)化是用什么方法，化學(xué)法？電轉(zhuǎn)化？原生質(zhì)體？ 2.你用G418篩選的時(shí)候抗生素濃度加到多大的？剛才聽你說還沒有進(jìn)行多拷貝篩選，估計(jì)你的抗性篩選是從最低濃度開始的。如果你是用電轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化的，建議你提高抗生素濃度進(jìn)行篩選，對(duì)抑制雜菌會(huì)有點(diǎn)作用，空板總比染了雜菌做一輪什么都沒有強(qiáng)。。。~~ 3.我對(duì)SMD1168不太熟悉，你線性化的是哪個(gè)位點(diǎn)？如果在HIS4內(nèi)部的話，其實(shí)可以多一步篩選，我記得smd1168是個(gè)HIS+吧（我不確定，你看看3.5K的說明書。。。） |
7樓2013-12-24 00:06:15
luwei13566
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額，如果有菌絲了那肯定是染菌了啊，酵母的顏色改變沒？趕緊去做一個(gè)鏡檢。絲狀真菌和酵母菌肯定不一樣的~， 如果你做幾次都是這個(gè)樣子的話,可能的原因有： 1.你的出發(fā)菌株可能已經(jīng)染菌了。 2.你轉(zhuǎn)化過程中染的雜菌。如果是電轉(zhuǎn)化最有可能出問題的就是電轉(zhuǎn)化杯，如果實(shí)在處理不好就換個(gè)試試 3.你的抗性篩選可能有問題。 其實(shí)你可以做一個(gè)菌落PCR驗(yàn)證一下。如果PCR驗(yàn)證了就直接誘導(dǎo)一次。管他什么形狀，關(guān)鍵還是要出蛋白，出活性，如果不出蛋白，沒有活性再考慮菌落形態(tài)的事情，因?yàn)橐撟C是你的線性化質(zhì)粒導(dǎo)致菌落形態(tài)的改變是一件非常困難的事情。 |
2樓2013-12-23 00:48:42
3樓2013-12-23 08:14:08
4樓2013-12-23 12:10:05
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