 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6949 | 回復(fù): 8 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
請問qRT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線中擴(kuò)增效率過高是怎么回事 已有3人參與
|
||
|
我在做4個(gè)目的基因和一個(gè)內(nèi)參基因qRT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，擴(kuò)增效率全部都超過了120%，最高的甚至達(dá)到190%。我現(xiàn)在唯一能確定的就是在加樣的過程中不同稀釋梯度（10倍的梯度）的模板cDNA在加樣過程中有相互污染，所以Ct值也不成線性的變化。我現(xiàn)在就是再重新做并嚴(yán)格避免污染，但是除了我確定的這個(gè)原因，還有其他的一些什么原因可能導(dǎo)致了擴(kuò)增效率過高呢？ 請有經(jīng)驗(yàn)的高手指教，非常謝謝！ 還有一個(gè)問題，就是我的內(nèi)參基因本身的豐度比其他4個(gè)目的基因的高很多，因?yàn)榧词鼓０逑♂屃?0^5倍了，但Ct值也沒有超過20，而其他的目的基因的Ct值都在24到31之間，這種內(nèi)參基因和目的基因本身的豐度懸殊這么大，這樣的內(nèi)參可以用來作為內(nèi)參嗎？是不是找一個(gè)與目的基因相當(dāng)?shù)牟判心�？感謝解惑！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有160人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- QPCR擴(kuò)增曲線異常
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴(kuò)增曲線怎么成這樣了呢？為什么?
已經(jīng)有15人回復(fù)
- RT-PCR擴(kuò)增效率
已經(jīng)有7人回復(fù)
- Real-time PCR溶解曲線Tm值，是不是在不同的儀器上做出來的不一樣？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 熒光定量pcr,以及內(nèi)參基因的選擇。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 為什么熒光定量PCR擴(kuò)增曲線呈倒S型
已經(jīng)有27人回復(fù)
- QPCR之 擴(kuò)增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- QPCR擴(kuò)增效率太低
已經(jīng)有20人回復(fù)
- rt-qpcr標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- QPCR之 擴(kuò)增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴(kuò)增效率低
已經(jīng)有16人回復(fù)
- qPCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線成線性很差，擴(kuò)增效率低，是什么原因
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)qpcr問題，擴(kuò)增效率太高！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- real-time PCR相對(duì)定量2 -△△CT法中用來判斷擴(kuò)增效率的標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么制作？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴(kuò)增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點(diǎn)
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴(kuò)增曲線的分析
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 定量PCR擴(kuò)增效率過高(SYBR)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 一個(gè)關(guān)于qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題。謝謝！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光pcr標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- RT-PCR擴(kuò)增圖和溶解曲線跑成這樣
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光PCR擴(kuò)增曲線問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】qRT-PCR
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】rt-PCR作出的擴(kuò)增曲線剛開始為什么會(huì)有一條基線？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】實(shí)時(shí)熒光定量PCR的擴(kuò)增效率低該如何改進(jìn)？
已經(jīng)有5人回復(fù)
4樓2014-02-25 22:33:54
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-02-26 08:20:53
wybiology: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-03-01 15:23:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-02-26 08:20:53
wybiology: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-03-01 15:23:56
|
... 1. 引物不合適，不僅僅有擴(kuò)增效率不夠100%的情況出現(xiàn)，同樣也有擴(kuò)增效率超過100%的情況，普通認(rèn)為90~110%的擴(kuò)增效率比較合適。你的擴(kuò)增效率過高，你需要在引物上下下工夫。 2. 這樣的內(nèi)參肯定不合適，內(nèi)參有很多，建議第一次做的時(shí)候，多上幾個(gè)內(nèi)參（3個(gè)左右）一起看看比較合適。 祝實(shí)驗(yàn)順利，說的不周之處希望高手指點(diǎn)  |
2樓2014-02-25 20:22:54
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
3樓2014-02-25 20:25:58
5樓2014-02-26 15:28:00
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286分人工智能專業(yè)請求調(diào)劑愿意跨考！ +3 | lemonzzn 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +5 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +9 | 冷笙123 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +9 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 一志愿天大材料與化工（085600）總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 司空. 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過A區(qū)線 +7 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +5 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +11 | 冬十三 2026-03-15 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +6 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學(xué)員97LZgn 2026-03-13 | 4/200 |
|