 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6965 | 回復(fù): 8 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
請問qRT-PCR的標準曲線中擴增效率過高是怎么回事 已有3人參與
|
||
|
我在做4個目的基因和一個內(nèi)參基因qRT-PCR的標準曲線時，擴增效率全部都超過了120%，最高的甚至達到190%。我現(xiàn)在唯一能確定的就是在加樣的過程中不同稀釋梯度（10倍的梯度）的模板cDNA在加樣過程中有相互污染，所以Ct值也不成線性的變化。我現(xiàn)在就是再重新做并嚴格避免污染，但是除了我確定的這個原因，還有其他的一些什么原因可能導(dǎo)致了擴增效率過高呢？ 請有經(jīng)驗的高手指教，非常謝謝！ 還有一個問題，就是我的內(nèi)參基因本身的豐度比其他4個目的基因的高很多，因為即使模板稀釋了10^5倍了，但Ct值也沒有超過20，而其他的目的基因的Ct值都在24到31之間，這種內(nèi)參基因和目的基因本身的豐度懸殊這么大，這樣的內(nèi)參可以用來作為內(nèi)參嗎？是不是找一個與目的基因相當?shù)牟判心�？感謝解惑！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有120人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- QPCR擴增曲線異常
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴增曲線怎么成這樣了呢？為什么?
已經(jīng)有15人回復(fù)
- RT-PCR擴增效率
已經(jīng)有7人回復(fù)
- Real-time PCR溶解曲線Tm值，是不是在不同的儀器上做出來的不一樣？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 熒光定量pcr,以及內(nèi)參基因的選擇。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 為什么熒光定量PCR擴增曲線呈倒S型
已經(jīng)有27人回復(fù)
- QPCR之 擴增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- QPCR擴增效率太低
已經(jīng)有20人回復(fù)
- rt-qpcr標準曲線問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- QPCR之 擴增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴增效率低
已經(jīng)有16人回復(fù)
- qPCR的標準曲線成線性很差，擴增效率低，是什么原因
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求高人指點qpcr問題，擴增效率太高！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- real-time PCR相對定量2 -△△CT法中用來判斷擴增效率的標準曲線怎么制作？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴增曲線的分析
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 定量PCR擴增效率過高(SYBR)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 一個關(guān)于qPCR標準曲線的問題。謝謝！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光pcr標準曲線問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- RT-PCR擴增圖和溶解曲線跑成這樣
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光PCR擴增曲線問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】qRT-PCR
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】rt-PCR作出的擴增曲線剛開始為什么會有一條基線？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】實時熒光定量PCR的擴增效率低該如何改進？
已經(jīng)有5人回復(fù)
by小寧
木蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1613.7
- 帖子: 43
- 在線: 19.9小時
- 蟲號: 3020213
- 注冊: 2014-03-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
8樓2015-07-08 14:41:20
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-02-26 08:20:53
wybiology: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-03-01 15:23:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-02-26 08:20:53
wybiology: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-03-01 15:23:56
|
... 1. 引物不合適，不僅僅有擴增效率不夠100%的情況出現(xiàn)，同樣也有擴增效率超過100%的情況，普通認為90~110%的擴增效率比較合適。你的擴增效率過高，你需要在引物上下下工夫。 2. 這樣的內(nèi)參肯定不合適，內(nèi)參有很多，建議第一次做的時候，多上幾個內(nèi)參（3個左右）一起看看比較合適。 祝實驗順利，說的不周之處希望高手指點  |
2樓2014-02-25 20:22:54
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
3樓2014-02-25 20:25:58
4樓2014-02-25 22:33:54
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | Sanmu-124 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +4 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +4 | jhx777 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +13 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +10 | z1z2z3879 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +3 | 溪云珂 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 15188958825 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 材料考研調(diào)劑生
+3
|
黃粱一夢千年 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿國科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑
+7
|
2117205181 2026-03-21 | 8/400 |
|