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zc10917金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
新手SDS PAGE每日一問(wèn) 已有2人參與
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昨日第一次跑膠，只做了分離膠，沒(méi)弄濃縮膠，師姐表示不知道怎么灌濃縮膠，望給位前輩指導(dǎo)，有視頻啥的最好了。 跑膠的條件是12% page 100v跑了1小時(shí)(溴酚藍(lán)沒(méi)變一條線(xiàn))，然后380v跑到底 不管怎么說(shuō)跑了一塊膠，用CBB染色，過(guò)夜，不過(guò)早上有點(diǎn)事中午才來(lái)收。估計(jì)染了15個(gè)小時(shí)吧， 是不是太長(zhǎng)了，總之結(jié)果是感覺(jué)膠明顯變小了. 然后脫色，能夠看到有條帶。我加的樣品中只含BSA(分子量66kd)，上樣量大概是1微克，蛋白預(yù)先在含有DTT的上樣緩沖中95℃反應(yīng)5分鐘。 條帶有兩個(gè)問(wèn)題：1 條帶位置離上樣口很近 2 條帶不是直線(xiàn)而是折線(xiàn) 今天做的和昨天差不多， 但感覺(jué)膠很容易碎 不知道是什么回事 希望各位前輩給予指導(dǎo) |
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5樓2014-03-25 16:52:11
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare: 應(yīng)助指數(shù)+1 2014-03-25 17:25:59
首先，沒(méi)有濃縮膠你這個(gè)電泳做出來(lái)能用嗎。。。。。 然后，我覺(jué)得你的膠應(yīng)該做的不好，做得好的話(huà)，圖跑的還是可以的，你也可以試試在膠的一側(cè)掛上冰。。。 最后，建議你把《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》這本書(shū)好好看看 |
2樓2014-02-28 21:28:06
3樓2014-03-05 11:06:37
zc10917
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4樓2014-03-05 12:49:42
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