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H+ATPase酶活測定 已有1人參與
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我現(xiàn)在得到一個(gè)質(zhì)膜H+-ATPase，在原核中表達(dá)，分離純化后得到蛋白，想測一下酶活，請(qǐng)問怎么測？ （剛開始接觸原核表達(dá)） |
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2樓2014-05-02 01:53:31
3樓2014-05-02 10:41:23
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2014-07-16 17:19:46
【答案】應(yīng)助回帖
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質(zhì)膜H+-ATPase 活性檢測，其他H+-ATP酶參考下 0．5 mL酶反應(yīng)液含3 mmol·L～ ATP，25 mmol·L Hepes—Tris(pH 6．5)[這里可以做一個(gè)梯度，來測定下此酶的最適PH]，3 mmol·L～ MgSO4， 50mmol · L一 KC1，0．015 (w／v)Triton X一100（視酶種類選擇添加），加入15～ 30 mkg的膜蛋白啟動(dòng)反應(yīng)，37℃溫育30 min，以18% 三氯乙酸終止反應(yīng)。 其間按需加入待測酶抑制劑來檢測酶的純度。 按Ohinishi 的方法檢測無機(jī)磷的釋放。酶 活單位用 mol Pi·mg protein·h 表示。 |
5樓2014-07-16 17:58:30
6樓2014-07-16 17:59:37
bobo123_77
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 帖子: 17
- 在線: 14.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 1949317
- 注冊: 2012-08-21
- 專業(yè): 植物生理與生化
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樓主您好，我最近也在做H+ATPase的原核表達(dá)，換過好多個(gè)菌株了還是沒有表達(dá)，不知道樓主用的是什么載體，謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-06-05 17:04:31
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