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H+ATPase酶活測定 已有1人參與
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我現(xiàn)在得到一個質(zhì)膜H+-ATPase，在原核中表達，分離純化后得到蛋白，想測一下酶活，請問怎么測？ （剛開始接觸原核表達） |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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質(zhì)膜H+-ATPase 活性檢測，其他H+-ATP酶參考下 0．5 mL酶反應(yīng)液含3 mmol·L～ ATP，25 mmol·L Hepes—Tris(pH 6．5)[這里可以做一個梯度，來測定下此酶的最適PH]，3 mmol·L～ MgSO4， 50mmol · L一 KC1，0．015 (w／v)Triton X一100（視酶種類選擇添加），加入15～ 30 mkg的膜蛋白啟動反應(yīng)，37℃溫育30 min，以18% 三氯乙酸終止反應(yīng)。 其間按需加入待測酶抑制劑來檢測酶的純度。 按Ohinishi 的方法檢測無機磷的釋放。酶 活單位用 mol Pi·mg protein·h 表示。 |
5樓2014-07-16 17:58:30
2樓2014-05-02 01:53:31
3樓2014-05-02 10:41:23
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4樓2014-07-16 17:19:46
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