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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物化學 » H+ATPase酶活測定
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[求助]
H+ATPase酶活測定 已有1人參與
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我現(xiàn)在得到一個質膜H+-ATPase，在原核中表達，分離純化后得到蛋白，想測一下酶活，請問怎么測？ （剛開始接觸原核表達） |
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 蛋白質生物學實驗經(jīng)驗 |
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3樓2014-05-02 10:41:23
2樓2014-05-02 01:53:31
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本帖內容被屏蔽 |
4樓2014-07-16 17:19:46
【答案】應助回帖
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質膜H+-ATPase 活性檢測，其他H+-ATP酶參考下 0．5 mL酶反應液含3 mmol·L～ ATP，25 mmol·L Hepes—Tris(pH 6．5)[這里可以做一個梯度，來測定下此酶的最適PH]，3 mmol·L～ MgSO4， 50mmol · L一 KC1，0．015 (w／v)Triton X一100（視酶種類選擇添加），加入15～ 30 mkg的膜蛋白啟動反應，37℃溫育30 min，以18% 三氯乙酸終止反應。 其間按需加入待測酶抑制劑來檢測酶的純度。 按Ohinishi 的方法檢測無機磷的釋放。酶 活單位用 mol Pi·mg protein·h 表示。 |
5樓2014-07-16 17:58:30
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