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H+ATPase酶活測(cè)定 已有1人參與
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我現(xiàn)在得到一個(gè)質(zhì)膜H+-ATPase，在原核中表達(dá)，分離純化后得到蛋白，想測(cè)一下酶活，請(qǐng)問怎么測(cè)？ （剛開始接觸原核表達(dá)） |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2014-07-16 17:19:46
2樓2014-05-02 01:53:31
3樓2014-05-02 10:41:23
【答案】應(yīng)助回帖
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質(zhì)膜H+-ATPase 活性檢測(cè)，其他H+-ATP酶參考下 0．5 mL酶反應(yīng)液含3 mmol·L～ ATP，25 mmol·L Hepes—Tris(pH 6．5)[這里可以做一個(gè)梯度，來測(cè)定下此酶的最適PH]，3 mmol·L～ MgSO4， 50mmol · L一 KC1，0．015 (w／v)Triton X一100（視酶種類選擇添加），加入15～ 30 mkg的膜蛋白啟動(dòng)反應(yīng)，37℃溫育30 min，以18% 三氯乙酸終止反應(yīng)。 其間按需加入待測(cè)酶抑制劑來檢測(cè)酶的純度。 按Ohinishi 的方法檢測(cè)無機(jī)磷的釋放。酶 活單位用 mol Pi·mg protein·h 表示。 |
5樓2014-07-16 17:58:30
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