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pgex 4t-1載體 無須誘導(dǎo) 已有1人參與
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1、我想從產(chǎn)朊假絲酵母菌中擴(kuò)增出尿酸酶的基因 但是查genenbank中沒有產(chǎn)朊假絲酵母菌來源的尿酸酶mRNA只有DNA 看一些文獻(xiàn)設(shè)計的引物是按照DNA設(shè)計的 是不是在做PCR的過程中省去逆轉(zhuǎn)錄的步驟 直接擴(kuò)增呢 2、設(shè)計引物時目的基因的5'端都是以ATG開頭的 在目的基因的兩端加入酶切位點是在設(shè)計好的引物基礎(chǔ)上加4-6堿基作為酶切位點還是在5'端改幾個堿基使之成為酶切位點？ 3、兩個目的基因連接 之間要加入一個酶切位點 我知道不能加目的基因、載體中存在的 但是不存在的酶切位點還有很多 我該怎么選擇？ 4、將PGEX 4T-1改造成無需誘導(dǎo)即可表達(dá)目的基因的載體 是刪除其中的lacIq嗎？如何刪除？刪除后如何將載體重新連接起來呢？ 求大神指導(dǎo) |
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2014-07-21 08:32:26
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2014-07-21 08:32:26
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先下載這個載體的序列和圖譜，比如addgenel里面就有，見http://www.addgene.org/vector-database/2876/ 注釋里面的ORF frame 3 3441 4400就是編碼lacI的序列 |
7樓2014-07-19 16:41:40
8樓2014-07-20 10:21:00
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9樓2014-07-20 20:29:05
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