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raohuihua新蟲 (小有名氣)
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[求助]
粘性末端老是連接不上
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小妹最近在做一個(gè)質(zhì)粒與片段粘性末端連接，體系如下： 載體6055bp 3ul 片段1758bp 4ul 10xT4ligase buffer 1ul T4 ligase (Takara) 1ul PEG 4000 1ul.............................10ul，4°過夜，轉(zhuǎn)化TOP10 片段是PCR擴(kuò)增膠回收得到，載體和片段均用NcoI 酶切回收純化，沒有測濃度，但是有跑膠，亮度還行，載體是GN抗性的，片段是 tet 抗性，轉(zhuǎn)化后我分別鋪了tet 、tet+GN的板，都沒有長，究竟是什么原因呢？附上我的電泳圖，有哪位大俠能夠指導(dǎo)一下？不甚感激。 后來又換了個(gè)體系，如下，還是沒有連接成功 載體6055bp 2ul 片段1758bp 5ul 10xT4ligase buffer 1ul T4 ligase (Takara) 1ul ddH20 1ul................10ul w27h2626338_1404100224_785.jpg |
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raohuihua
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jamesfeng
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