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mingming1990新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
RT-PCR 2△△Ct法，陰性對(duì)照與目標(biāo)基因PCR后產(chǎn)物的溶解曲線和跑膠條帶幾乎一樣？ 已有1人參與
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各位大神： 第一次發(fā)帖，十分緊急！麻煩幫忙回答一下以下問(wèn)題： 個(gè)人做RT-PCR 熒光實(shí)時(shí)相對(duì)定量，用的是 2△△Ct法，但是陰性對(duì)照NTC與加了模板的目標(biāo)基因PCR后產(chǎn)物的溶解曲線和跑膠條帶幾乎一樣！ 而且：①目標(biāo)基因與NTC的Ct值僅相差不到5；②NTC的溶解曲線起峰單一且高度與目標(biāo)基因相近；③瓊脂糖跑膠結(jié)果，兩者條帶亮度與位置也幾乎相同。 個(gè)人使用的是一次性無(wú)菌槍頭，勤換PE手套，操作臺(tái)為超凈臺(tái)，PCR擴(kuò)增體系也更換過(guò)，今天還重新訂了引物重新稀釋（以防引物已被污染），但情況沒(méi)有好轉(zhuǎn)。 有人說(shuō)可能是污染，讓我訂濾芯槍頭看情況是否好轉(zhuǎn)。 請(qǐng)問(wèn)，污染可能只污染目標(biāo)基因么？因?yàn)槲业哪繕?biāo)基因P有這個(gè)問(wèn)題，但是管家基因G就沒(méi)有這個(gè)問(wèn)題，都是一個(gè)板子做出來(lái)的。 具體情況在圖上，希望各位大神多多提意見(jiàn)！謝謝！ 1.png 2.png 3.png |
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zulingling
新蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2014-07-24 21:13:15
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