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_wuliao_木蟲 (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒DNA轉染遇到的一些問題 已有5人參與
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| 本人是學化學專業(yè)的，現(xiàn)在交叉做點生物上的細胞轉染實驗，我用的是納米材料轉染PEGFP-C1質(zhì)粒，用的是CHO細胞。我發(fā)現(xiàn)，每次用熒光顯微鏡看熒光的時候都能看到模模糊糊的，沒辦法聚焦的熒光，而且這個熒光也明顯沒有用lipsome 2000轉染的量多，不知道這個熒光到底是哪來的？我的材料是沒有熒光的，而且我用lipsome 2000轉染過，熒光是非常強的，不知道我的實驗遇到了什么問題。 |
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【答案】應助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-25 22:01:50
_wuliao_: 金幣+8, ★★★很有幫助 2014-07-28 09:22:32
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_wuliao_: 金幣+8, ★★★很有幫助 2014-07-28 09:22:32
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“熒光不一樣”是怎么不一樣？強度不一樣？波段不一樣？ GFP是綠色熒光，excitation/emission的波段是488nm/509nm。我不是太明白你觀察的方式，如果用同樣的濾鏡可以看到的話，應該就是同一熒光了。熒光強度跟轉染量/表達量有很大關系。有可能你的納米材料轉染效率本身就沒有l(wèi)ipsome 2000那么高。 你可以轉染之后用流式測定一下轉染率。并且做一下對照組，同時用納米材料轉染別的質(zhì)粒，最好是帶有外源標記基因但是非熒光的。比如表達人類表面抗原之類。以確認你的轉染不會產(chǎn)生自身熒光。 |
4樓2014-07-25 20:48:33
gyesang
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2樓2014-07-25 14:08:13
_wuliao_
木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-07-25 15:42:22
5樓2014-07-26 09:54:13
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