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_wuliao_木蟲 (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染遇到的一些問題 已有5人參與
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| 本人是學(xué)化學(xué)專業(yè)的，現(xiàn)在交叉做點(diǎn)生物上的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，我用的是納米材料轉(zhuǎn)染PEGFP-C1質(zhì)粒，用的是CHO細(xì)胞。我發(fā)現(xiàn)，每次用熒光顯微鏡看熒光的時(shí)候都能看到模模糊糊的，沒辦法聚焦的熒光，而且這個(gè)熒光也明顯沒有用lipsome 2000轉(zhuǎn)染的量多，不知道這個(gè)熒光到底是哪來的？我的材料是沒有熒光的，而且我用lipsome 2000轉(zhuǎn)染過，熒光是非常強(qiáng)的，不知道我的實(shí)驗(yàn)遇到了什么問題。 |
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gyesang
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2樓2014-07-25 14:08:13
_wuliao_
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3樓2014-07-25 15:42:22
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“熒光不一樣”是怎么不一樣？強(qiáng)度不一樣？波段不一樣？ GFP是綠色熒光，excitation/emission的波段是488nm/509nm。我不是太明白你觀察的方式，如果用同樣的濾鏡可以看到的話，應(yīng)該就是同一熒光了。熒光強(qiáng)度跟轉(zhuǎn)染量/表達(dá)量有很大關(guān)系。有可能你的納米材料轉(zhuǎn)染效率本身就沒有l(wèi)ipsome 2000那么高。 你可以轉(zhuǎn)染之后用流式測(cè)定一下轉(zhuǎn)染率。并且做一下對(duì)照組，同時(shí)用納米材料轉(zhuǎn)染別的質(zhì)粒，最好是帶有外源標(biāo)記基因但是非熒光的。比如表達(dá)人類表面抗原之類。以確認(rèn)你的轉(zhuǎn)染不會(huì)產(chǎn)生自身熒光。 |
4樓2014-07-25 20:48:33
【答案】應(yīng)助回帖
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如果所有的實(shí)驗(yàn)條件都一樣，只有轉(zhuǎn)染試劑不一樣，那應(yīng)該是你合成的納米材料的轉(zhuǎn)染效率不如脂質(zhì)體2000吧. 不過細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有影響，你的納米材料對(duì)CHO的轉(zhuǎn)染效率可能不如脂質(zhì)體2000，但是對(duì)其它細(xì)胞，可能你的納米材料的轉(zhuǎn)染效率又有可能比脂質(zhì)體2000.樓主不妨一試 |
5樓2014-07-26 09:54:13
_wuliao_
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8樓2014-07-29 11:24:42
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10樓2014-09-09 14:29:47
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