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_wuliao_木蟲 (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染遇到的一些問題 已有5人參與
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| 本人是學(xué)化學(xué)專業(yè)的，現(xiàn)在交叉做點(diǎn)生物上的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，我用的是納米材料轉(zhuǎn)染PEGFP-C1質(zhì)粒，用的是CHO細(xì)胞。我發(fā)現(xiàn)，每次用熒光顯微鏡看熒光的時(shí)候都能看到模模糊糊的，沒辦法聚焦的熒光，而且這個熒光也明顯沒有用lipsome 2000轉(zhuǎn)染的量多，不知道這個熒光到底是哪來的？我的材料是沒有熒光的，而且我用lipsome 2000轉(zhuǎn)染過，熒光是非常強(qiáng)的，不知道我的實(shí)驗(yàn)遇到了什么問題。 |
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7樓2014-07-28 19:00:00
gyesang
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2樓2014-07-25 14:08:13
_wuliao_
木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-07-25 15:42:22
【答案】應(yīng)助回帖
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_wuliao_: 金幣+8, ★★★很有幫助 2014-07-28 09:22:32
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_wuliao_: 金幣+8, ★★★很有幫助 2014-07-28 09:22:32
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“熒光不一樣”是怎么不一樣？強(qiáng)度不一樣？波段不一樣？ GFP是綠色熒光，excitation/emission的波段是488nm/509nm。我不是太明白你觀察的方式，如果用同樣的濾鏡可以看到的話，應(yīng)該就是同一熒光了。熒光強(qiáng)度跟轉(zhuǎn)染量/表達(dá)量有很大關(guān)系。有可能你的納米材料轉(zhuǎn)染效率本身就沒有l(wèi)ipsome 2000那么高。 你可以轉(zhuǎn)染之后用流式測定一下轉(zhuǎn)染率。并且做一下對照組，同時(shí)用納米材料轉(zhuǎn)染別的質(zhì)粒，最好是帶有外源標(biāo)記基因但是非熒光的。比如表達(dá)人類表面抗原之類。以確認(rèn)你的轉(zhuǎn)染不會產(chǎn)生自身熒光。 |
4樓2014-07-25 20:48:33
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