 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 744 | 回復(fù): 3 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
梅子清酒木蟲 (初入文壇)
|
[求助]
啟動(dòng)子克隆前的PCR問(wèn)題 已有1人參與
|
||
|
用的是高保真酶擴(kuò)增的，目標(biāo)產(chǎn)物大小在1500左右，選用梯度PCR，梯度為50-60度，所選的溫度比引物單上的已經(jīng)小了很多，是去除前端之后重新計(jì)算的退火溫度，但是為什么這樣還是擴(kuò)增不出來(lái)？Marker 是用DL5000 擴(kuò)增的體系是（單位：微升）： 5*Primer Star Buffer 5 dNTP Mix 2 Primer 1+1 cDNA 1.5 e 0.25 水 13.75 擴(kuò)增程序： 98 3min 98 10s 50-60 15s 72 2min 72 10min 循環(huán)數(shù)是30 13448-16081.JPG |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有276人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 合成的引物該怎么處理，用超純水還是什么稀釋？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 已知一個(gè)啟動(dòng)子序列，怎么知道它是否為特異性的？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 請(qǐng)問(wèn)如何判定是否為啟動(dòng)子序列呢？用什么軟件分析？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 引物設(shè)計(jì)——下游引物是否需要考慮閱讀框問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 多克隆酶切位點(diǎn)可以任意插入基因嗎？不用考慮啟動(dòng)子的距離嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 關(guān)于啟動(dòng)子融合載體的構(gòu)建
已經(jīng)有3人回復(fù)
- TAIL-PCR克隆基因的啟動(dòng)子
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 關(guān)于克隆植物基因啟動(dòng)子序列？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 高GC含量基因片段PCR問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 如何確定啟動(dòng)子
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】5‘UTR的問(wèn)題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于啟動(dòng)子區(qū)域克隆
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教個(gè)關(guān)于inverse PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助/交流】基因組中克隆啟動(dòng)子
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于體外轉(zhuǎn)錄的模板
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】從RNA到cDNA合成再到克隆PCR的實(shí)驗(yàn)技巧和操作細(xì)節(jié)問(wèn)題若干，尋求解答
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【專題】PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南
已經(jīng)有535人回復(fù)
- 怎樣克隆抗性基因及其啟動(dòng)子
已經(jīng)有8人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-09-02 15:37:48
梅子清酒: 金幣+2, ★有幫助, 恩！找到原因了，重新反轉(zhuǎn)錄了cDNA，這個(gè)東西很奇怪，之前合成的cDNA沒(méi)有凍融過(guò)，但就是用不了。 2014-09-04 11:42:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-09-02 15:37:48
梅子清酒: 金幣+2, ★有幫助, 恩！找到原因了，重新反轉(zhuǎn)錄了cDNA，這個(gè)東西很奇怪，之前合成的cDNA沒(méi)有凍融過(guò)，但就是用不了。 2014-09-04 11:42:20
|
遇到很難解決的問(wèn)題的時(shí)候，只能一項(xiàng)一項(xiàng)的分析排除： 1，模板問(wèn)題，是不是模板存在阻礙PCR的成分； 2，引物問(wèn)題，是不是引物設(shè)計(jì)不合理； 3，taq酶問(wèn)題，是不是taq酶對(duì)于反應(yīng)程序有特殊的要求； 4，操作問(wèn)題，是不是有一些操作的細(xì)節(jié)還沒(méi)注意。 這4個(gè)問(wèn)題是常見的PCR問(wèn)題，如果能夠?qū)⒛０?引物/taq/操作都一一確定無(wú)誤，那么必定能夠P出來(lái)。 希望實(shí)驗(yàn)成功。 |
3樓2014-09-02 13:53:52
梅子清酒
木蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2137.9
- 帖子: 38
- 在線: 18.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2931954
- 注冊(cè): 2014-01-14
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
2樓2014-09-02 12:29:23
梅子清酒
木蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2137.9
- 帖子: 38
- 在線: 18.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2931954
- 注冊(cè): 2014-01-14
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
4樓2014-09-04 11:41:31
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +8 | Y-cap 2026-03-29 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求收留 +6 | 1943443204 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +9 | hanamiko 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程 317求調(diào)劑 +7 | JKSOIID 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿廈門大學(xué)材料工程專碩354找調(diào)劑�。�！ +5 | 貝唄鋇鋇 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工科，295，接受跨專業(yè)調(diào)劑 +3 | lmnlzy 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑：一志愿湖南大學(xué) 材料與化工（085600），已過(guò)六級(jí)。 +9 | XX小鄧 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +21 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +8 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +7 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京航空航天大學(xué)材料學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個(gè)好覺(jué)_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +4 | 小懶蟲不懶了 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 柚柚yoyo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 總分322求生物學(xué)/生化與分子/生物信息學(xué)相關(guān)調(diào)劑 +5 | 星沉uu 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|