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修香戀

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[求助] 熒光定量PCR溶解曲線的峰不單一，求大神看一下！已有5人參與

做熒光定量PCR時(shí)，溶解曲線的圖像是這個(gè)樣子，請(qǐng)大神幫忙分析下原因，感激不盡！

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1樓 2014-11-19 17:09:50

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修香戀

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7樓: Originally posted by happydove at 2014-11-20 13:42:19
是不是引物的特異性不是很好
我一般都是設(shè)計(jì)幾對(duì) 挑最好的用

這對(duì)引物我做過(guò)好幾次，前幾次都沒(méi)問(wèn)題，就這次是這個(gè)樣子。不知道會(huì)不會(huì)是cDNA的影響？

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9樓2014-11-20 16:16:59

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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 19:25:02

存在引物二聚體：提示引物濃度偏高，降低濃度即可
有非特異擴(kuò)增：建議跑膠確認(rèn)一下

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2樓2014-11-19 17:22:12

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2樓: Originally posted by bbqlhb at 2014-11-19 17:22:12
存在引物二聚體：提示引物濃度偏高，降低濃度即可
有非特異擴(kuò)增：建議跑膠確認(rèn)一下

但是同一個(gè)引物，前幾次擴(kuò)增沒(méi)出現(xiàn)這種情況。會(huì)不會(huì)是cDNA的問(wèn)題？

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3樓2014-11-19 17:23:54

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3樓: Originally posted by 修香戀 at 2014-11-19 17:23:54
但是同一個(gè)引物，前幾次擴(kuò)增沒(méi)出現(xiàn)這種情況。會(huì)不會(huì)是cDNA的問(wèn)題？...

cDNA、引物與上次的濃度一致嗎？

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4樓2014-11-19 17:27:13

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