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張grape鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
pcr擴(kuò)增基因及測(cè)序相關(guān)問題的求助 急�。。� 已有2人參與
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我正在擴(kuò)增一個(gè)2808bp的基因 因?yàn)橥暾蛄泻茈y一次擴(kuò)出 我就分了三段去擴(kuò) 其中中間一段為2000多bp 擴(kuò)出來后連接T載體 挑單克隆測(cè)序 一直測(cè)不出有 相同序列的單克隆 已經(jīng)測(cè)了20多個(gè) 都有堿基的不一樣 后來我采用提高退火溫度 增加擴(kuò)增特異性的方法去擴(kuò) 還是沒測(cè)出相同序列的 之后又換了taq酶 一開始用 la taq 后來用的pfu 也沒測(cè)出來 一直有較多堿基不同，我在ncbi上查了一下 這個(gè)基因有3個(gè)transcript variant 不知道是否是這個(gè)原因，現(xiàn)在一籌莫展 希望 哪位大神幫我指點(diǎn)迷津 我將感激不盡�。。。�！ |
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