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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白電泳/WB » 融合蛋白表達問題。
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[交流]
融合蛋白表達問題。
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| 幾個蛋白融合表達，轉染真核細胞，western有的蛋白能檢測到，有的蛋白檢測不到？ORF沒有問題。 |
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2樓2015-05-08 16:07:41
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3樓2015-05-08 16:07:52
惡魔的左眼
木蟲 (正式寫手)
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4樓2015-05-12 14:31:21
5樓2015-05-15 20:46:22
mazhenggen
鐵蟲 (正式寫手)
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★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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導致蛋白不表達的因素很多：1、確定基因插入到宿主細胞基因組中，位置是否合適，拷貝數(shù)有多少，可以通過PCR和Southern blot檢測；2、檢測細胞中目的蛋白mRNA水平，驗證DNA的轉錄是否有問題。3、如果mRNA正常，那么有可能是融合蛋白結構不穩(wěn)定導致降解，降解的因素也有很多，像蛋白結構不穩(wěn)定容易被細胞中蛋白水解酶降解，還有融合蛋白對細胞的代謝有影響，抑制蛋白表達，也有可能蛋白的mRNA不穩(wěn)定，半衰期短容易降解。 樓主可以逐個排除蛋白不表達的因素，找到原因問題就可以好解決了，希望回復有用。 |
6樓2015-05-17 10:26:40
肖大爺1314
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8樓2019-12-16 10:09:29
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