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站著別動(dòng)君新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
融合蛋白表達(dá)問(wèn)題。
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| 幾個(gè)蛋白融合表達(dá),轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞,western有的蛋白能檢測(cè)到,有的蛋白檢測(cè)不到?ORF沒(méi)有問(wèn)題。 |
新蟲(chóng) (初入文壇)
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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導(dǎo)致蛋白不表達(dá)的因素很多:1、確定基因插入到宿主細(xì)胞基因組中,位置是否合適,拷貝數(shù)有多少,可以通過(guò)PCR和Southern blot檢測(cè);2、檢測(cè)細(xì)胞中目的蛋白mRNA水平,驗(yàn)證DNA的轉(zhuǎn)錄是否有問(wèn)題。3、如果mRNA正常,那么有可能是融合蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定導(dǎo)致降解,降解的因素也有很多,像蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定容易被細(xì)胞中蛋白水解酶降解,還有融合蛋白對(duì)細(xì)胞的代謝有影響,抑制蛋白表達(dá),也有可能蛋白的mRNA不穩(wěn)定,半衰期短容易降解。 樓主可以逐個(gè)排除蛋白不表達(dá)的因素,找到原因問(wèn)題就可以好解決了,希望回復(fù)有用。 |

金蟲(chóng) (小有名氣)
| LZ做哺乳動(dòng)物表達(dá)蛋白,也得給個(gè)具體點(diǎn)的例子吧,比如什么蛋白,感覺(jué)樓主問(wèn)的怪怪的~祝好! |

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