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站著別動(dòng)君新蟲 (小有名氣)
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[交流]
融合蛋白表達(dá)問(wèn)題。
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| 幾個(gè)蛋白融合表達(dá)，轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，western有的蛋白能檢測(cè)到，有的蛋白檢測(cè)不到？ORF沒(méi)有問(wèn)題。 |
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4樓2015-05-12 14:31:21
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導(dǎo)致蛋白不表達(dá)的因素很多：1、確定基因插入到宿主細(xì)胞基因組中，位置是否合適，拷貝數(shù)有多少，可以通過(guò)PCR和Southern blot檢測(cè)；2、檢測(cè)細(xì)胞中目的蛋白mRNA水平，驗(yàn)證DNA的轉(zhuǎn)錄是否有問(wèn)題。3、如果mRNA正常，那么有可能是融合蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定導(dǎo)致降解，降解的因素也有很多，像蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定容易被細(xì)胞中蛋白水解酶降解，還有融合蛋白對(duì)細(xì)胞的代謝有影響，抑制蛋白表達(dá)，也有可能蛋白的mRNA不穩(wěn)定，半衰期短容易降解。 樓主可以逐個(gè)排除蛋白不表達(dá)的因素，找到原因問(wèn)題就可以好解決了，希望回復(fù)有用。 |
6樓2015-05-17 10:26:40
肖大爺1314
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| LZ做哺乳動(dòng)物表達(dá)蛋白，也得給個(gè)具體點(diǎn)的例子吧，比如什么蛋白，感覺(jué)樓主問(wèn)的怪怪的~祝好！ |
7樓2015-12-29 11:14:37
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