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站著別動君新蟲 (小有名氣)
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[交流]
融合蛋白表達(dá)問題。
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| 幾個蛋白融合表達(dá)，轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，western有的蛋白能檢測到，有的蛋白檢測不到？ORF沒有問題。 |
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肖大爺1314
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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導(dǎo)致蛋白不表達(dá)的因素很多：1、確定基因插入到宿主細(xì)胞基因組中，位置是否合適，拷貝數(shù)有多少，可以通過PCR和Southern blot檢測；2、檢測細(xì)胞中目的蛋白mRNA水平，驗(yàn)證DNA的轉(zhuǎn)錄是否有問題。3、如果mRNA正常，那么有可能是融合蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定導(dǎo)致降解，降解的因素也有很多，像蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定容易被細(xì)胞中蛋白水解酶降解，還有融合蛋白對細(xì)胞的代謝有影響，抑制蛋白表達(dá)，也有可能蛋白的mRNA不穩(wěn)定，半衰期短容易降解。 樓主可以逐個排除蛋白不表達(dá)的因素，找到原因問題就可以好解決了，希望回復(fù)有用。 |
6樓2015-05-17 10:26:40
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